百里香酚是一種單萜類化合物,抗炎作用是其多種藥理活性之一。子宮內膜炎是病原微生物感染子宮內膜而引起的一種生殖系統疾病,給經濟動物的治療帶來了巨大困難。然而,百里香酚對子宮內膜炎的抗炎作用及機制的報道相對較少。因此,本實驗研究了百里香酚對LPS誘導的山羊子宮內膜上皮細胞(gEECs)炎性反應的抑制作用及機制,為子宮內膜炎的中草藥治療提供科學的理論參考。
1.百里香酚對gEECs增殖的影響。采用MTT法檢鋇,JJgEECs的活力,利用瑞氏吉姆薩染色法觀察gEECs的形態結構變化,并通過LDH實驗測定細胞膜的通透性。結果顯示,百里香酚對gEECs的安全濃度為100¨g/mL,該濃度范圍內藥物對細胞的活力和形態結構無顯著影響;大于該濃度的百里香酚可顯著增大gEECs的膜通透性,造成細胞損傷,產生了細胞毒性。因此,選擇濃度分別為100、50、25肛g/mL的百里香酚用于后續實驗的研究。
2.百里香酚對LPS誘導gEECs的炎性因子分泌的影響。將實驗分為三組:對照組(contr01);炎性模型組(LPS);LPs+百里香酚組。LPS添加濃度為5¨g/mL,百里香酚添加濃度分別為100、50、25肛g/mL。應用NO檢測試劑盒檢測百里香酚對LPS誘導的NO釋放量的影響:利用ELISA檢
測百里香酚對LPS誘導的炎性因子分泌的影響。結果顯示,不同劑量的百里香酚能不同程度地抑f日IJLPS誘導的gEECsqbTNF—c【、IL—lB、IL一6、IL.10、PGE2、NO及MMP一2、MMP.9的分泌增加。結果表明,百里香酚對LPS誘導的gEECs炎性反應具有顯著的抑制作用,且減輕了gEECs因過度的炎性反應造成的結構性損傷。
3.百里香酚對LPS誘導gEECs的TLR4/NF—r.B信號通路的影響。利用Real—Time PCR方法對細胞因子幾.1B及TLR4信號通路相關節點蛋白CDl4、TLR4、TRIF(TICAM)和MyD88的基因表達量進行檢測,同時采用RT—PCR方法+IWB方法檢測7NF—rd3p65的基因和蛋白表達量。結果顯示,不同劑量的百里香酚能不同程度地抑制LPS誘導gEECs的IL一1B、CDl4、TLR4和TRIF(TICAM)基因表達的上調,但對MyD88的基因表達無影響。另外,百里香酚下調了NF—r,Bp65的基因和蛋白表達水平。結果表明,百里香酚對LPS誘導的gEECs炎性反應的抑制作用可能與抑制TRjF依賴的TLR4/NF.n13信號傳遞途徑的活化相關。
總之,百里香酚通過調節炎性因子的分泌發揮其抗炎活性。同時,百里香酚還可抑制TⅪF依賴的TLR4/NF.rJ3信號的傳遞途徑,且對gEECs無顯著毒活性,可作為治療子宮內膜炎的候選藥物。